T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)是細(xì)胞免疫檢測(cè)的最新指標(biāo)之一。隨著抗T細(xì)胞單克隆抗體的問(wèn)世及各種檢測(cè)方法的建立。 T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)已經(jīng)在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究中得到廣泛應(yīng)用。

一、T淋巴細(xì)胞亞群及其功能：

T淋巴細(xì)胞及其分類主要應(yīng)用抗T細(xì)胞表面抗原McAb.根據(jù)T淋巴細(xì)胞表面分化抗原將成熟T細(xì)胞分為CD4+、CD8-和CD4-、CD8+兩大亞群，T淋巴細(xì)胞的功能與表現(xiàn)型之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系是相對(duì)的，其免疫活性可能受激活“微環(huán)境”的影響，并受MHC抗原的制約，許多研究證明，CD4+T細(xì)胞具有殺傷活性，介導(dǎo)Ι類抗原不相容時(shí)的靶細(xì)胞溶解。TU等研究表明，CD4+的細(xì)胞毒活性存在兩種完全不同的機(jī)理，并證明TH1和TH2的細(xì)胞毒活性不同。前者強(qiáng)，后者弱或無(wú)活性。Dennert等發(fā)現(xiàn)，克隆化的T淋巴細(xì)胞具有輔助，細(xì)胞毒活性和遲發(fā)型超敏反應(yīng)作用，這種功能的多樣性有賴于所采用的分析方法。CD4+細(xì)胞識(shí)別Ⅱ類MHC抗原，其效應(yīng)的發(fā)揮也受Ⅱ類抗原的制約；CD8+細(xì)胞識(shí)別Ι類MHC抗原，發(fā)揮免疫效應(yīng)也受其控制。

二、T細(xì)胞亞群的檢測(cè)方法：

人類T細(xì)胞亞群的檢測(cè)方法種類繁多，但大多都是根據(jù)T細(xì)胞表面抗原與其McAb的特異性反應(yīng)設(shè)計(jì)的。根據(jù)檢查標(biāo)本的取材及所采用的方法主要分為兩大類：1.體液中的T細(xì)胞亞群的分析；2、組織中T細(xì)胞亞群的檢測(cè)。前者包括血液、胸腹腔積液，腦脊液等；后者包括腫瘤浸潤(rùn)細(xì)胞，移植物侵潤(rùn)細(xì)胞以及炎癥浸潤(rùn)細(xì)胞等。

(一)、體液中T細(xì)胞亞群的檢測(cè)方法

一般情況下，體液需要Ficoll-Hypaqu分離富含淋巴細(xì)胞的單個(gè)核細(xì)胞（MNC），然后根據(jù)條件選擇適宜的免疫學(xué)方法檢測(cè)。

1、酶免疫染色技術(shù)：常規(guī)分離MNC，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105~106個(gè)/ml，取細(xì)胞用不同亞群的McAb(一抗)和酶標(biāo)抗體（二抗）或與酶抗體復(fù)合鏈接物，在相應(yīng)底物作用下顯色，普通光鏡計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞，計(jì)算出各亞群的百分比。

2、流式細(xì)胞儀：機(jī)體免疫狀態(tài)是衡量機(jī)體是否患病的重要指標(biāo)，目前多采用流式細(xì)胞術(shù)檢監(jiān)測(cè)機(jī)體的免疫狀態(tài)，其中最重要的指標(biāo)是檢測(cè)T、B和NK淋巴細(xì)胞的水平。T細(xì)胞主要包括T輔助細(xì)胞（Th）和T抑制細(xì)胞（Ts）細(xì)胞亞群。CD3+細(xì)胞代表外周血中總的成熟T細(xì)胞，理論上應(yīng)約等CD4+細(xì)胞和CD8+細(xì)胞的總和，但往往出現(xiàn)CD4+加CD8+細(xì)胞之和大于CD3+，這是因?yàn)镃D4+細(xì)胞包括CD3+/CD4+細(xì)胞（真正Th細(xì)胞）和CD3-CD4+細(xì)胞（非Ts細(xì)胞），而后者包括CD3-CD8+CD16+CD56+細(xì)胞（一部分NK細(xì)胞）和CD3-CD8+CD16+CD56-(未知細(xì)胞)。由此可見(jiàn)，真正的TH細(xì)胞是CD3+CD4細(xì)胞，真正Ts細(xì)胞是CD3+CD8+細(xì)胞。尤其當(dāng)患者NK細(xì)胞明顯增加時(shí)，會(huì)使CD4細(xì)胞和CD8細(xì)胞的總和大于CD3+細(xì)胞，因此，用三色熒光標(biāo)記才能分析真正的輔助性T細(xì)胞和抑制性T細(xì)胞。

3、免疫熒光染色法：MNC懸液的濃度調(diào)整至1×107個(gè)/ml，可用細(xì)胞懸液與抗壓群McAb在小試管內(nèi)是反應(yīng)，也可將細(xì)胞懸液涂片，然后同酶免疫染色操作。根據(jù)條件可選擇直接法和間接法。T細(xì)胞表面抗原直接或間接與熒光抗體結(jié)合，通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀（FCM）計(jì)數(shù)。

4、補(bǔ)體殺傷試驗(yàn)：將淋巴細(xì)胞同其McAb(應(yīng)是細(xì)胞毒抗體)作用，加入兔或豚鼠血清（預(yù)先選擇對(duì)淋巴細(xì)胞無(wú)毒性）提供補(bǔ)體?？乖贵w結(jié)合，在補(bǔ)體參與下,T細(xì)胞膜受損，通透性增加，然后用活細(xì)胞或死細(xì)胞染色法染色，光鏡計(jì)數(shù)死細(xì)胞百分比，以確定相應(yīng)T淋巴細(xì)胞亞群比例。

5、花環(huán)形成試驗(yàn)：常用的有紅細(xì)胞花環(huán)和細(xì)菌花環(huán)，通過(guò)抗T細(xì)胞McAb與T細(xì)胞表面抗原結(jié)合形成可觀察的花環(huán)。

(1）直接紅細(xì)胞花環(huán)試驗(yàn)：經(jīng)醛化的紅細(xì)胞與T細(xì)胞McAb連接成指示劑。當(dāng)淋巴細(xì)胞周圍結(jié)合4個(gè)以上紅細(xì)胞者為陽(yáng)性細(xì)胞。

(2)間接紅細(xì)胞花環(huán)試驗(yàn)：以結(jié)合了抗鼠IgG的醛化紅細(xì)胞為指示細(xì)胞，淋巴細(xì)胞借T細(xì)胞McAb同指示細(xì)胞結(jié)合形成花環(huán)，光鏡計(jì)數(shù)，結(jié)合3個(gè)以上紅細(xì)胞者為陽(yáng)性細(xì)胞。

(3）SPA菌花環(huán)試驗(yàn)，以葡萄球菌為指示劑。SPA同抗T細(xì)胞McAb或抗鼠IgG結(jié)合，然后直接或者間接與淋巴細(xì)胞形成花環(huán)，染色后油鏡下觀察。凡周圍連接10個(gè)以上葡萄球菌的淋巴細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞。

（二）、組織中T細(xì)胞亞群的檢測(cè)：

由于淋巴細(xì)胞表面抗原比較脆弱，組織切片不宜常規(guī)制片，而需采用冰凍切片。常用的方法有酶免疫組織化學(xué)方法和免疫熒光技術(shù)。如需對(duì)T細(xì)胞進(jìn)行定位，可選擇分離的淋巴細(xì)胞進(jìn)行分析。

三、T細(xì)胞亞群檢測(cè)的臨床意義：

體液中T細(xì)胞亞群的分析和組織內(nèi)的定位檢測(cè)作為判斷細(xì)胞免疫功能的一項(xiàng)重要指標(biāo)，對(duì)惡性腫瘤，自身免疫性疾病，血液系統(tǒng)疾病，同種組織器官移植，以及各種傳染病的診斷，發(fā)病機(jī)理的研究，指導(dǎo)免疫治療和判斷預(yù)后等方面平均具有重要意義。外周血T細(xì)胞亞群CD3+、CD4+和CD8+的改變常見(jiàn)的有：

（一）、CD3+細(xì)胞數(shù)的改變，表示T淋巴細(xì)胞總數(shù)在外周血MNC中的比例的變化。

1、下降常見(jiàn)于：某些白血病，應(yīng)用免疫抑制劑，化療或放療過(guò)程中，長(zhǎng)期接受放射性物質(zhì)，先天性細(xì)胞免疫缺陷者，艾滋病，多發(fā)性骨髓瘤，傳染性單核細(xì)胞增多癥，某些病毒感染性疾病。

2、增高可見(jiàn)于：重癥肌無(wú)力，某些自身免疫性疾病，慢性活動(dòng)性肝炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等。

（二）、CD4+/CD8+細(xì)胞比值改變：表明機(jī)體細(xì)胞免疫功能紊亂。不管是CD4+或CD8+細(xì)胞數(shù)發(fā)生變化均影響該比值。

1、下降是由于CD4+細(xì)胞減少或CD8+細(xì)胞增多。常見(jiàn)于再生障礙性貧血，某些白血病，骨髓移植后，急性乙型肝炎及無(wú)癥狀攜帶者，傳染性單核細(xì)胞增多癥，免疫缺陷綜合癥，艾滋病，某些病毒感染，惡性腫瘤，結(jié)核病，同種器官移植排斥階段等。

2、升高常由于CD4+細(xì)胞增多或CD8+細(xì)胞減少所致?？梢?jiàn)于某些自身免疫性疾病，系統(tǒng)性紅斑狼瘡。

四、評(píng)價(jià)及發(fā)展前景：

根據(jù)T細(xì)胞表面標(biāo)志，檢測(cè)T細(xì)胞亞群是目前觀察機(jī)體細(xì)胞免疫水平的重要方法之一。但由于T細(xì)胞亞群的復(fù)雜性，表面標(biāo)志和功能之間的相對(duì)性，以及檢測(cè)方法的多樣性等，所以只根據(jù)外周血CD3+，CD4+和CD8+細(xì)胞亞群的水平判斷機(jī)體細(xì)胞免疫功能有一定局限性，需要結(jié)合具體疾病和病情程度進(jìn)行綜合分析，近年來(lái)新的抗T細(xì)胞亞群McAb及新型McAb的問(wèn)世，為T細(xì)胞亞群檢測(cè)的進(jìn)一步發(fā)展提供了可能。鑒于目前的研究狀況和存在的問(wèn)題，T細(xì)胞亞群的檢測(cè)可從以下幾方面改進(jìn)和發(fā)展：1、應(yīng)用多種McAb做雙標(biāo)記或多標(biāo)記檢測(cè)，也可用雙特異性McAb染色，對(duì)T細(xì)胞進(jìn)一步分群。2、改進(jìn)檢測(cè)技術(shù)，確定標(biāo)準(zhǔn)的檢查方法，建立一定的質(zhì)量控制措施，提高檢測(cè)水平；3、結(jié)合細(xì)胞因子和組織中T細(xì)胞亞群的檢測(cè)，綜合判斷機(jī)體免疫功能；4、建立檢測(cè)特異性T細(xì)胞亞群或克隆的方法。

雷德生物免疫細(xì)胞

雷德生物主要銷售業(yè)務(wù)以免疫細(xì)胞為核心的免疫產(chǎn)品系列，圍繞PBMC,CD4+,CD8+,CD14+,CD19+,Treg等免疫細(xì)胞亞群產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目進(jìn)行市場(chǎng)推廣和營(yíng)銷網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，重要的客戶群體集中在蛋白抗體藥物研發(fā)企業(yè)和細(xì)胞免疫治療企業(yè)及醫(yī)療機(jī)構(gòu)，提供以免疫細(xì)胞功能分析為基礎(chǔ)特色的科研產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目，主要包括專用于生物大分子抗體藥物研發(fā)篩選，藥物毒理藥效學(xué)分析，高通量免疫性疾病研究的標(biāo)準(zhǔn)化免疫細(xì)胞生物樣本庫(kù)，細(xì)胞治療領(lǐng)域中的細(xì)胞功能分析的產(chǎn)品和服務(wù)，高通量免疫性疾病研究的標(biāo)準(zhǔn)化免疫細(xì)胞生物樣本庫(kù)，細(xì)胞免疫領(lǐng)域中的細(xì)胞功能分析的產(chǎn)品和服務(wù)，圍繞世界500強(qiáng)醫(yī)藥研發(fā)中心，國(guó)內(nèi)抗體藥物研發(fā)企業(yè)，細(xì)胞治療技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室等機(jī)構(gòu)形成了較強(qiáng)的品牌影響力。

質(zhì)量控制

PBMC取自血液制品，按照標(biāo)準(zhǔn)操作流程分離制備，保證不同批次間細(xì)胞質(zhì)量的穩(wěn)定性。建立了嚴(yán)格的細(xì)胞鑒定流程，所提供的原代細(xì)胞均經(jīng)過(guò)細(xì)胞類型特異性標(biāo)記物、細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)，保證細(xì)胞純度＞95%，細(xì)胞活性＞90%；每個(gè)批次的產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)微生物、HIV、HBV、HCV、梅毒等檢測(cè)。